壳聚糖季铵盐-Zn(II)催化磷酸双酯及DNA水解动力学研究

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发表于 2022-8-27 13:32:12 | 显示全部楼层 |阅读模式
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雅宝题库答案
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雅宝题库解析:
生物体的主要遗传物质DNA的骨架结构是由异常稳定的磷酸双酯键连接而成的,在生理条件下十分稳定,很难水解断裂。因此,研究磷酸双酯水解酶模型有助于深入认识天然酶的催化机理和设计新型人工核酸酶,逐渐成为模拟酶领域的前沿课题之一。本文将不同分子量的壳聚糖进行季铵化改性制备成壳聚糖季铵盐,通过红外光谱和核磁共振测试方法对其进行结构表征,并以此作为配体与Zn(II)配位形成HTACC-Zn(II)金属配合物,作为磷酸双酯水解酶模型研究其催化BNPP水解的动力学过程,同时还研究了HTACC-Zn(II)与DNA的结合方式及其对质粒DNA的催化裂解性能,并参考相关文献和根据实验结果提出了可能的催化裂解机理。HTACC-Zn(II)对BNPP水解反应具有良好的催化活性。在最佳配比HTACC/Zn(II)=2和最佳pH值8.0时,HTACC-Zn(II)催化BNPP水解反应基本符合酶促反应动力学模型,一级速率常数kobs随HTACC-Zn(II)浓度增加呈线性增加趋势。随着壳聚糖分子量降低,HTACC-Zn(II)催化BNPP水解反应的kobs逐渐增加,最高可达8.1×10-6 s-1,为BNPP自发水解的7.3×104倍。HTACC-Zn(II)不仅对DNA的模拟底物BNPP具有良好的催化活性,同时还能够有效地裂解质粒DNA。HTACC-Zn(II)催化DNA裂解反应为假一级反应,裂解性能随着HTACC-Zn(II)浓度增加逐渐增加。当壳聚糖分子量逐渐降低时,HTACC-Zn(II)催化DNA裂解的性能逐渐增加,一级速率常数kobs最高可达1.7×10-5 s-1,为DNA自发水解的1.7×106倍,与研究报道的Zn(II)配合物模型作为DNA剪切试剂的裂解速率相比也在同一数量级,有力地证明了其作为潜在的DNA剪切工具的可能性。荧光光谱和圆二色光谱结果表明,HTACC-Zn(II)与DNA之间的结合方式可能是静电结合方式,由此我们推测HTACC-Zn(II)催化DNA裂解可能的机理为:HTACC-Zn(II)通过静电作用与DNA结合,同时HTACC-Zn(II)与水分子配位形成的水合金属配合物解离生成活性物种ZnL2OH-,进攻DNA骨架结构中的磷酸双酯键,促进磷酸双酯键水解断裂,从而催化DNA裂解。





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